GlyR α2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402179-NIC

GLRA2 codifica la subunità alfa-2 (GlyR α2) del recettore della glicina, un canale del cloruro regolato da ligando appartenente alla famiglia dei recettori Cys-loop, che media una rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. GlyR α2 contribuisce alla segnalazione glicinergica sinaptica ed extrasinaptica che modella l’eccitabilità neuronale, la sincronizzazione delle reti e l’equilibrio tra eccitazione e inibizione attraverso la conduttanza del cloruro. Questo recettore partecipa a processi di neurosviluppo, inclusi la maturazione delle sinapsi e il raffinamento dei circuiti, e la sua funzione si interseca con vie che regolano la trasmissione sinaptica inibitoria e l’omeostasi ionica. Alterazioni della segnalazione glicinergica e cambiamenti nella sequenza o nell’espressione di GLRA2 sono stati collegati, in studi genetici e funzionali, a fenotipi neuroevolutivi e a disturbi correlati a crisi epilettiche o ad aumentata eccitabilità, a supporto della sua rilevanza per la ricerca neuroscientifica meccanicistica.

GlyR α2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GLRA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GLRA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GLRA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GLRA2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.