GLP-1R Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400847-LAC

GLP1R codifica per il recettore del peptide-1 simile al glucagone (GLP-1R), un GPCR di classe B che si accoppia principalmente a Gαs per aumentare i livelli di cAMP e attivare la segnalazione PKA/EPAC. Gli effetti a valle includono trascrizione dipendente da CREB, modulazione della dinamica del calcio intracellulare e crosstalk di via con MAPK/ERK e PI3K/AKT, che modellano l’eccitabilità cellulare, la secrezione e i programmi genici metabolici. Nella biologia delle isole pancreatiche, la segnalazione di GLP-1R amplifica la secrezione di insulina stimolata dal glucosio e sostiene le risposte funzionali delle cellule β, mentre nei tessuti extra-pancreatici contribuisce alla segnalazione neuroendocrina e gastrointestinale. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di GLP1R sono state implicate in fenotipi di disregolazione metabolica rilevanti per la ricerca su diabete e obesità e forniscono un appiglio meccanicistico per studiare il controllo trascrizionale guidato dal cAMP in sistemi cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale GLP-1R (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GLP1R in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GLP-1R (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GLP1R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GLP-1R. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GLP1R e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.