GIPR Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402895-LAC

Il GIPR umano codifica il recettore del polipeptide insulinotropico glucosio‑dipendente, un GPCR di classe B che si accoppia principalmente a Gs per stimolare l’adenilato ciclasi e la segnalazione cAMP/PKA in seguito al legame del ligando incretinico. L’attivazione delle vie a valle può influenzare l’omeostasi del calcio, la trascrizione genica e i programmi di secrezione ormonale, collegando GIPR al sensing dei nutrienti e all’omeostasi metabolica. La segnalazione di GIPR interagisce con circuiti regolatori endocrini e neuroendocrini, e modifiche dell’espressione o della responsività del recettore sono state studiate nel contesto dell’obesità, della dinamica della secrezione insulinica e di fenotipi metabolici correlati. In quanto recettore di membrana con una farmacologia ligando–recettore ben definita, GIPR viene anche utilizzato per studiare il trafficking dei GPCR, la desensibilizzazione e i meccanismi di segnalazione biased in modelli cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale GIPR (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GIPR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GIPR (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GIPR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GIPR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GIPR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.