ghrelin Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425542-LAC

Il gene murino **Ghrl** codifica la grelina, un ormone peptidico prodotto dallo stomaco che segnala attraverso il recettore secretagogo dell’ormone della crescita (GHSR) per regolare l’appetito, l’omeostasi energetica, il metabolismo del glucosio e le risposte neuroendocrine, inclusa la secrezione dell’ormone della crescita. La grelina modula i circuiti ipotalamici che controllano il comportamento alimentare e interagisce con i processi di ricompensa, stress e ritmi circadiani, collegando lo stato nutrizionale periferico alla segnalazione centrale. Gli effetti a valle includono modifiche della segnalazione cAMP/PKA e programmi trascrizionali metabolici più ampi in fegato, tessuto adiposo e muscolo, con ulteriori ruoli nella motilità gastrointestinale e nell’infiammazione. Una segnalazione della grelina deregolata è stata associata a fenotipi legati a obesità e cachessia, resistenza all’insulina e alterata responsività allo stress, rendendo **Ghrl** un utile punto di ingresso per studiare le vie metaboliche e neuroendocrine nei modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale ghrelin (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ghrl in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ghrelin (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ghrl, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ghrelin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ghrl e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.