GFAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403022-NIC

GFPT1 codifica la glutammina–fruttosio-6-fosfato amidotransferasi 1 (GFAT1), l’enzima limitante della via biosintetica dell’esosammina che converte fruttosio-6-fosfato e glutammina in glucosammina-6-fosfato. Controllando il flusso verso la produzione di UDP-GlcNAc, GFAT1 influenza la N- e O-GlcNAcilazione delle proteine, il controllo qualità delle proteine nel reticolo endoplasmatico (ER) e il sensing metabolico legato alla disponibilità di glucosio e amminoacidi. Questa via interseca la segnalazione insulinica, le risposte allo stress e la sintesi di glicoproteine, collocando GFPT1 come un nodo chiave che collega lo stato nutrizionale alle modificazioni post-traduzionali e all’omeostasi cellulare. Alterazioni dell’attività di GFPT1 e dell’output della via dell’esosammina sono state associate alla sindrome miastenica congenita e a fenomeni di glicosilazione deregolata e a fenotipi metabolici in contesti rilevanti per patologie umane.

GFAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GFPT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GFPT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GFPT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GFPT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.