GD3 Synthase Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404015-LAC

ST8SIA1 codifica la GD3 sintasi, una sialiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la formazione del ganglioside GD3 a partire da GM3, contribuendo a definire il panorama dei glicosfingolipidi cellulari. Controllando i livelli dei gangliosidi della serie b, la GD3 sintasi influenza la composizione dei microdomini della membrana plasmatica e modula vie di segnalazione legate a proliferazione, adesione, traffico dei recettori e risposte allo stress. Un’alterazione dell’attività di ST8SIA1 è stata associata a cambiamenti nei programmi di stato cellulare e a processi immunitari e neuronali, rendendolo un nodo utile per studiare la glicosilazione di membrana e la trasduzione del segnale. In biologia delle malattie umane, la biosintesi disregolata dei gangliosidi è spesso analizzata nel contesto del comportamento delle cellule tumorali, della neurobiologia e di fenotipi correlati all’infiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale GD3 Synthase (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ST8SIA1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GD3 Synthase (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ST8SIA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GD3 Synthase. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ST8SIA1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.