GCN2 Plasmide Double Nickase (m): sc-424196-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCN2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GCN2 Double Nickase Plasmid (m) e il GCN2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Eif2ak4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCN2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424196-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCN2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424196-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Eif2ak4** codifica **GCN2**, una chinasi serina/treonina che collega la carenza di amminoacidi e altri stress nutrizionali al controllo della traduzione fosforilando **eIF2α**. Questo asse di segnalazione attiva la **risposta integrata allo stress (ISR)**, rimodellando i programmi di traduzione dell’mRNA e coordinando una trascrizione adattativa attraverso vie dipendenti da **ATF4**, con effetti a valle su autofagia, bilancio redox e omeostasi metabolica. L’attività di GCN2 interseca mTOR e i meccanismi di rilevamento dello stress associati ai ribosomi per modulare crescita e sopravvivenza cellulare durante la privazione di nutrienti. Una segnalazione di GCN2 deregolata è stata implicata in contesti quali infiammazione, neurodegenerazione e biologia tumorale, rendendo **Eif2ak4** un bersaglio frequente per studi meccanicistici delle reti di adattamento allo stress.
GCN2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif2ak4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif2ak4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif2ak4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif2ak4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.