GBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402140-ACT

Il gene umano **GBP2** codifica per la *guanylate-binding protein 2*, una grande GTPasi inducibile dall’interferone che si localizza sulle membrane intracellulari e sostiene l’immunità cellulo-intrinseca contro diversi patogeni. **GBP2** partecipa a reti di segnalazione dell’immunità innata a valle dell’asse IFN-γ/STAT1 e contribuisce a processi associati all’inflammasoma, alla restrizione antimicrobica e al rimodellamento dei compartimenti che contengono i patogeni. Modellando i programmi genici stimolati dagli interferoni e gli output infiammatori, un’espressione alterata di **GBP2** è stata associata a disregolazione immunitaria e a contesti di malattie infiammatorie, ed è spesso studiata come marcatore e mediatore delle risposte guidate dagli interferoni in modelli di cancro e di infezione.

GBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GBP2 nelle cellule tumorali con espressione di GBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.