GBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401778-ACT

La GBP1 umana (guanylate binding protein 1) è una grande GTPasi inducibile dall’interferone che agisce come effettore antimicrobico e infiammatorio a valle della segnalazione JAK–STAT. GBP1 si associa alle membrane intracellulari e ai compartimenti contenenti patogeni per regolare l’immunità cellulo-autonoma, incluse le risposte associate all’inflammasoma, la restrizione della replicazione microbica e la modulazione di processi citoscheletrici e vescicolari. Attraverso il suo ruolo nelle reti geniche stimolate dall’interferone, GBP1 contribuisce a plasmare programmi trascrizionali dell’immunità innata che influenzano la presentazione dell’antigene e la segnalazione guidata dalle citochine. Un’espressione deregolata di GBP1 è frequentemente utilizzata come marcatore di un’elevata attività dell’interferone ed è stata collegata a processi patologici infiammatori e a stati del microambiente tumorale-immunitario in diversi contesti di malattia.

GBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GBP1 nelle cellule tumorali con espressione di GBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.