GATA4 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420496-ACT

Il gene Gata4 del topo codifica GATA4, un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per regolare programmi genici che controllano la cardiogenesi, la specificazione dell’endoderma e la differenziazione di molteplici linee mesodermiche e viscerali. Si integra con vie di sviluppo e cofattori chiave, tra cui NKX2-5, TBX5, le proteine FOG e la segnalazione BMP/TGF-β, per coordinare reti trascrizionali che governano il destino cellulare e la morfogenesi tissutale. Nei tessuti adulti, GATA4 contribuisce all’omeostasi cardiaca e al rimodellamento in risposta allo stress, con effetti a valle sull’espressione di geni sarcomerici, sulla funzione mitocondriale e sulle vie di sopravvivenza cellulare. Un’attività deregolata di GATA4 è associata a difetti cardiaci congeniti ed è stata implicata in una più ampia riprogrammazione trascrizionale dello sviluppo e di patologie, rilevante per la ricerca cardiovascolare e gastrointestinale.

GATA4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gata4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GATA4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gata4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gata4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GATA4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gata4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GATA4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GATA4 nelle cellule tumorali con espressione di Gata4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.