GATA-6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400724-NIC

GATA6 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco GATA-6, un regolatore che definisce la linea cellulare della differenziazione endodermica e mesodermica e che controlla reti geniche coinvolte nell’organogenesi, nell’identità epiteliale e nei programmi della muscolatura liscia. Nelle cellule umane, GATA-6 integra input di segnalazione dello sviluppo per modulare circuiti trascrizionali che governano proliferazione, migrazione e impegno del destino cellulare, includendo vie legate al patterning dipendente da Wnt, BMP e Notch. Un’espressione deregolata di GATA6 o alterazioni del numero di copie sono state associate a difetti congeniti dello sviluppo e a stati trascrizionali oncogeni o oncosoppressivi dipendenti dal contesto in linee gastrointestinali, pancreatiche e polmonari. Queste proprietà rendono GATA-6 un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale della differenziazione, la plasticità di linea e il rimodellamento adattativo allo stress in modelli rilevanti per la malattia.

GATA-6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GATA6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GATA6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GATA6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GATA6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.