galectin-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417680-ACT

Il gene umano **LGALS3** codifica la **galectina-3**, una lectina legante i **β-galattosidi** che regola le interazioni **cellula–cellula** e **cellula–matrice**, l’endocitosi e la segnalazione intracellulare nei compartimenti epiteliali e immunitari. La galectina-3 modula vie associate a infiammazione e immunità innata, inclusi l’attivazione dei macrofagi, i programmi trascrizionali legati a **NF-κB** e il rimodellamento guidato dalle citochine; inoltre può influenzare, in modo dipendente dal contesto, la resistenza all’apoptosi, l’autofagia e le risposte allo stress ossidativo. Attraverso i suoi ruoli in adesione, migrazione e turnover della matrice extracellulare, **LGALS3** è spesso studiato nella biologia della fibrosi e nel dialogo con il microambiente tumorale, nonché in processi cardiometabolici e neuroinfiammatori. Un’espressione deregolata della galectina-3 è stata associata a stati infiammatori cronici e a fenotipi di progressione in molteplici tumori, rendendola un nodo molecolare ampiamente utilizzato per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.

galectin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LGALS3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LGALS3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LGALS3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LGALS3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-3 nelle cellule tumorali con espressione di LGALS3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.