GADD 45γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402483-ACT

GADD45G（GADD45γ）は、ストレス応答性をもつGADD45ファミリーの一員で、遺伝毒性刺激や炎症性シグナルを細胞周期チェックポイントの制御、DNA修復シグナル伝達、アポトーシスへと結び付けます。MAPKシグナル伝達を中心とする経路、p53依存的なストレス応答、ならびにCDK活性の調節に関与し、細胞損傷時や分化プログラムの過程で増殖停止（成長停止）を成立させます。これらの機能を通じて、GADD45γはゲノム安定性の維持や、免疫細胞・造血細胞の状態制御に寄与します。GADD45Gの発現異常は、増殖制御の破綻、異常なストレスシグナル、さらに複数の悪性腫瘍で報告されているエピジェネティックなサイレンシング（発現抑制）パターンと関連しており、腫瘍抑制ネットワークの機構研究における有用な標的（ノード）となります。

GADD 45γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GADD45Gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GADD 45γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GADD45G 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGADD45G転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GADD 45γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGADD45G遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGADD 45γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGADD45G発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGADD 45γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。