G3BP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-424175-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- G3BP1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il G3BP1 Double Nickase Plasmid (m) e il G3BP1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira G3bp1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
G3BP1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424175-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
G3BP1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424175-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nel topo, il gene **G3bp1** codifica **G3BP1**, una proteina multifunzionale legante l’RNA che integra il metabolismo dell’mRNA con le risposte cellulari allo stress. G3BP1 è un elemento strutturale centrale dei granuli da stress e influenza l’inizio della traduzione, la stabilità dell’mRNA e l’assemblaggio dei complessi ribonucleoproteici, collegando questi processi a vie di segnalazione come il rilevamento dell’immunità innata e la segnalazione dello stress mediata da chinasi. Attraverso il suo ruolo nella dinamica dei granuli citoplasmatici di RNA e nelle interazioni proteina–RNA, l’alterazione dell’attività di G3BP1 viene studiata in contesti quali neurodegenerazione, risposte antivirali e adattamento delle cellule tumorali allo stress.
G3BP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus G3bp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di G3bp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di G3bp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con G3bp1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.