G3BP1CRISPR激活质粒(h): sc-400745-ACT

人源 G3BP1（G3BP 应激颗粒组装因子 1）是一种 RNA 结合蛋白，能够作为成核因子启动应激颗粒的形成，并在细胞应激过程中协调 mRNA 的分流与处置。它通过调控 mRNA 稳定性、翻译起始以及核糖核蛋白复合体重塑，整合来自翻译调控与先天免疫通路的信号，从而在下游影响细胞凋亡、抗病毒反应和细胞周期程序。G3BP1 参与与 eIF2α 介导的翻译停滞、MAPK 信号及 RNA 代谢相关的应激适应过程；其失调在多种疾病背景中与应激耐受性改变及异常增殖有关。由于 G3BP1 将 RNA 加工与应激响应信号相耦联，它在肿瘤生物学、神经退行性疾病以及宿主—病原体相互作用模型中被广泛研究。

G3BP1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性G3BP1的表达。

G3BP1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的G3BP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于G3BP1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性G3BP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的G3BP1位点，并能够研究内源性位点上依赖于G3BP1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在G3BP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟G3BP1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。