Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Furin Plasmide Double Nickase (m): sc-422141-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Furin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Furin Double Nickase Plasmid (m) e il Furin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Furin. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Furin Antibody (B-6): sc-133142
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Furin Plasmide Double Nickase (m) | sc-422141-NIC | 20 µg | $410.00 |
La furina (PCSK3) è una proprotein convertasi calcio-dipendente che, lungo la via secretoria—incluse la rete trans-Golgi e i compartimenti endosomiali—processa proteine precursori trasformandole in forme mature e bioattive. Mediante il clivaggio di substrati contenenti motivi basici, regola la maturazione di ormoni, fattori di crescita, recettori e metalloproteinasi, influenzando così cascate di segnalazione quali TGF-β/BMP, Notch e il rimodellamento della matrice extracellulare. Nei sistemi murini, l’attività della furina modella il patterning dello sviluppo, le risposte immunitarie e infiammatorie e la comunicazione cellula-cellula attraverso la proteolisi controllata di proteine di membrana e secrete. Un’alterazione del processamento dipendente dalla furina è stata collegata in letteratura a cambiamenti dell’omeostasi tissutale e alla fisiopatologia, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla segnalazione guidata da proteasi e sulla proteostasi.
Furin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Furin nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Furin. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Furin. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Furin interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.