FUCA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-405221-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FUCA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FUCA2 Double Nickase Plasmid (h) e il FUCA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FUCA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FUCA2 Antibody (B-11): sc-514038
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FUCA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405221-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FUCA2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405221-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUCA2 codifica la α-L-fucosidasi 2 lisosomiale, un’esoglicosidasi che rimuove residui terminali di fucosio dai glicoconiugati N- e O-legati e contribuisce al catabolismo e al rimodellamento dei glicani. Regolando il turnover di glicoproteine e glicolipidi fucosilati, FUCA2 influenza i processi di eliminazione dipendenti dai lisosomi e, più in generale, eventi di segnalazione alla superficie cellulare legati alla glicosilazione. Alterazioni dell’attività fucosidasica e dei pattern di fucosilazione sono state associate a cambiamenti nell’infiammazione, nel riconoscimento immunitario e nelle interazioni con la matrice extracellulare, rendendo FUCA2 un nodo utile per studiare la regolazione del glicoma. Un’espressione o un’attività deregolata delle fucosidasi, inclusa FUCA2, è stata riportata in contesti quali la biologia del cancro e fenotipi metabolici e immuno-correlati, a supporto di indagini meccanicistiche in sistemi modello pertinenti.
FUCA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FUCA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FUCA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FUCA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FUCA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.