FOXP3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422896-ACT

Il gene Foxp3 del topo codifica FOXP3, un fattore di trascrizione della famiglia forkhead/winged-helix che funge da regolatore definente di linea dei linfociti T regolatori (Treg) e da controllore centrale della tolleranza immunitaria. FOXP3 coordina programmi trascrizionali che governano le soglie di segnalazione del recettore dei linfociti T (TCR), la soppressione della via dell’IL-2 e il controllo, dipendente dalla cromatina, delle reti geniche delle citochine, contribuendo così a plasmare l’omeostasi immunitaria periferica. L’alterazione o l’espressione disregolata di FOXP3 compromette la differenziazione dei Treg e la loro funzione soppressiva, collegando questo asse a fenotipi infiammatori e simil-autoimmuni e a risposte modificate in modelli di malattie immuno-mediate. L’attività di FOXP3 è studiata anche nel contesto della plasticità delle cellule immunitarie, dell’infiammazione tissutale e delle interazioni tra tumore e sistema immunitario, in cui i programmi dei Treg influenzano i microambienti immunitari locali.

FOXP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Foxp3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Foxp3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Foxp3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Foxp3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXP3 nelle cellule tumorali con espressione di Foxp3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.