FOXM1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416676-ACT

FOXM1 (forkhead box M1) è un fattore di trascrizione associato alla proliferazione che coordina la progressione del ciclo cellulare regolando i geni necessari per la transizione G1/S e l’ingresso in mitosi, incluse vie che controllano la replicazione del DNA, l’assemblaggio del fuso mitotico e la segregazione dei cromosomi. Interagisce con reti regolatorie chiave come la segnalazione CDK–ciclina e i programmi di risposta al danno del DNA per bilanciare la divisione cellulare con l’integrità del genoma. Un’espressione aberrante di FOXM1 è spesso osservata nelle firme trascrizionali associate all’oncologia ed è collegata a crescita invasiva, instabilità genomica e risposte alterate allo stress cellulare, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per lo studio della biologia tumorale e del controllo del ciclo cellulare. Inoltre, FOXM1 contribuisce ai programmi di rimodellamento tissutale influenzando caratteristiche epitelio-mesenchimali e le risposte trascrizionali allo stress ossidativo e replicativo.

FOXM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXM1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.