FOXD1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420847-ACT

Foxd1 codifica il fattore di trascrizione forkhead box FOXD1, una proteina nucleare legante il DNA che regola la specificazione di linea e la definizione dei pattern durante lo sviluppo embrionale. Nel topo, FOXD1 è noto soprattutto per i ruoli nei progenitori stromali renali e nella nefrogenesi, dove coordina programmi mesenchimali che influenzano la ramificazione dell’uretere, il rimodellamento della matrice extracellulare e la segnalazione epitelio–stroma. L’attività di FOXD1 interseca vie di sviluppo fondamentali, incluse le vie di segnalazione WNT, BMP e TGF-β, contribuendo a plasmare la morfogenesi degli organi e le decisioni sul destino cellulare. Reti trascrizionali guidate da FOXD1 in modo deregolato sono rilevanti per anomalie dello sviluppo e vengono spesso sfruttate per studiare i meccanismi di differenziazione, l’attivazione stromale associata alla fibrosi e programmi trascrizionali oncogenici dipendenti dal contesto.

FOXD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Foxd1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Foxd1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Foxd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Foxd1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXD1 nelle cellule tumorali con espressione di Foxd1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.