Flk-1/KDR/VEGFR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400118-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Flk-1/KDR/VEGFR2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h) e il Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KDR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Flk-1/KDR/VEGFR2 Antibody (D-8): sc-393163
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Flk-1/KDR/VEGFR2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flk-1/KDR/VEGFR2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDR codifica il recettore tirosin-chinasico Flk-1/KDR/VEGFR2, uno dei principali recettori di segnalazione per i ligandi VEGF nelle cellule endoteliali vascolari. La dimerizzazione indotta dal ligando e l’autofosforilazione attivano le vie PI3K–AKT, RAS–RAF–MEK–ERK, PLCγ–PKC e quelle della famiglia SRC, coordinando proliferazione, migrazione e sopravvivenza endoteliale, nonché la permeabilità vascolare durante angiogenesi e vasculogenesi. La segnalazione di VEGFR2 interagisce inoltre con la produzione di ossido nitrico e con programmi di rimodellamento del citoscheletro che modellano la maturazione dei vasi e la formazione di gemme vascolari. Attività ed espressione deregolate di KDR sono ampiamente studiate nell’angiogenesi tumorale, nelle risposte neovascolari associate all’ischemia e nel rimodellamento vascolare infiammatorio.
Flk-1/KDR/VEGFR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.