Fibrinogen α Plasmide Double Nickase (h): sc-400793-NIC

FGA codifica la catena α del fibrinogeno, una delle tre catene polipeptidiche che si assemblano nel fibrinogeno esamerico (AαBβγ), sintetizzato principalmente dagli epatociti e secreto nel plasma. In seguito a una lesione vascolare, la trombina scinde il fibrinogeno generando monomeri di fibrina che polimerizzano e vengono stabilizzati da reticolazione mediata dal fattore XIII, formando l’impalcatura strutturale dei coaguli di sangue. La catena α del fibrinogeno contribuisce anche all’aggregazione piastrinica e alle interazioni cellula–matrice tramite legame con integrine e può influenzare la segnalazione infiammatoria all’interno della cascata della coagulazione. Alterazioni della sequenza o dell’espressione di FGA sono associate a disfibrinogenemia e a fenotipi emorragici o trombotici, rendendolo rilevante per studi su emostasi, rimodellamento della matrice extracellulare e biologia vascolare.

Fibrinogen α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FGA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FGA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FGA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FGA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.