FGF-9 Plasmide Double Nickase (h): sc-403118-NIC

FGF9 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 9 (FGF-9), un ligando secreto che si lega all’eparina e che segnala principalmente attraverso FGFR1c/FGFR2c/FGFR3c per regolare la proliferazione, la sopravvivenza e la differenziazione cellulare. L’attività di FGF-9 attiva le cascate canoniche dei recettori tirosin-chinasici, tra cui le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ, influenzando la patterning dello sviluppo, le risposte di riparazione tissutale e la comunicazione stroma–epitelio. Una disregolazione della segnalazione FGF9–FGFR è stata associata ad alterazioni dei programmi angiogenici e fibrotici ed è spesso oggetto di studio nelle reti oncogeniche dei fattori di crescita e nel rimodellamento del microambiente. Di conseguenza, FGF9 è un bersaglio comune per analisi meccanicistiche della dinamica della segnalazione paracrina, della specificazione di linea e del crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

FGF-9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FGF9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FGF9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FGF9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FGF9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.