FGF-9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403118-ACT

FGF9 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 9 (FGF-9), un mitogeno secreto legante l’eparina che segnala principalmente tramite i recettori FGFR per regolare la proliferazione e la sopravvivenza cellulare, nonché la specificazione di linea durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. L’attività di FGF-9 si integra con cascate di recettori tirosin-chinasici, incluse le vie di segnalazione MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ, influenzando le interazioni epitelio–mesenchimali, le risposte angiogeniche e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’espressione deregolata di FGF9 o un’alterata segnalazione della via FGFR sono state collegate a programmi di sviluppo modificati e a fenotipi oncogenici in molteplici contesti tissutali, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulle reti di fattori di crescita. In quanto ligando endogeno nel più ampio asse FGF–FGFR, FGF-9 viene spesso analizzato per i suoi effetti sui programmi trascrizionali che governano differenziamento, migrazione e proliferazione.

FGF-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FGF9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FGF9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FGF9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FGF9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-9 nelle cellule tumorali con espressione di FGF9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.