FGF-23 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425719-ACT

Il gene murino **Fgf23** codifica **FGF-23**, un fattore di crescita dei fibroblasti endocrino prodotto principalmente da osteociti e osteoblasti, che coordina l’omeostasi sistemica del fosfato e della vitamina D. Agendo attraverso complessi **FGFR–Klotho**, FGF-23 sopprime il riassorbimento renale del fosfato e modula gli enzimi del metabolismo della vitamina D, collegando i segnali derivati dall’osso alla funzione renale. Questo asse si integra con le vie del metabolismo minerale, inclusa la segnalazione del **PTH** e le cascate **recettore FGF–MAPK**, per mantenere l’equilibrio del fosfato e la mineralizzazione scheletrica. Un’attività di FGF-23 disregolata è associata ad anomalie nella gestione del fosfato e a fenotipi metabolici osso–rene, rendendo **Fgf23** un nodo utile per studiare il metabolismo minerale e il crosstalk endocrino nei modelli murini.

FGF-23 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fgf23 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-23 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fgf23 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fgf23, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-23. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fgf23 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-23 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-23 nelle cellule tumorali con espressione di Fgf23 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.