Ferroportin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400872-NIC

SLC40A1 codifica la ferroportina-1, il principale esportatore cellulare di ferro, che regola la disponibilità di ferro a livello sistemico e locale trasportando il ferro bivalente attraverso la membrana plasmatica. La funzione della ferroportina-1 è coordinata dal legame mediato dall’epcidina, seguito da internalizzazione e degradazione, collegando SLC40A1 alle vie dell’omeostasi del ferro, al riciclo del ferro nei macrofagi e all’assorbimento intestinale del ferro. Un’alterata attività di SLC40A1 compromette l’accumulo di ferritina, la saturazione della transferrina e le risposte allo stress ossidativo, con implicazioni per fenotipi da sovraccarico di ferro e meccanismi legati all’anemia. Inoltre, la ferroportina-1 influenza indirettamente la segnalazione infiammatoria e il metabolismo mitocondriale attraverso processi enzimatici e redox dipendenti dal ferro.

Ferroportin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC40A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC40A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC40A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC40A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.