FBXO3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425412-LAC

Il gene murino **Fbxo3** codifica **FBXO3**, un recettore di substrato di tipo F-box all’interno dei complessi di ubiquitina-ligasi E3 **SCF** (SKP1–CUL1–F-box), che conferisce specificità al turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la degradazione regolata di intermedi della segnalazione, FBXO3 può influenzare la dinamica della segnalazione infiammatoria e dell’immunità innata, le risposte allo stress cellulare e le vie della proteostasi. Un’attività alterata delle proteine F-box associate a SCF è frequentemente collegata a una segnalazione citochinica deregolata, a checkpoint anomali del ciclo cellulare e dello stress, e a vie più ampie rilevanti per i meccanismi delle malattie infiammatorie. **Fbxo3** rappresenta quindi un nodo utile per analizzare il controllo ubiquitina–proteasoma della trasduzione del segnale e dei programmi trascrizionali in modelli cellulari murini.

Le particelle di attivazione lentivirale FBXO3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fbxo3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FBXO3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fbxo3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FBXO3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fbxo3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.