FBXO3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403436-ACT

FBXO3 は、SCF（SKP1–CUL1–F-box）E3 ユビキチンリガーゼ複合体において基質認識を担う構成要素として機能する F-box タンパク質をコードし、特定のタンパク質をユビキチン化およびプロテアソーム分解へと導くのに寄与します。制御されたタンパク質分解を介して、FBXO3 は自然免疫および炎症シグナル伝達に影響を及ぼし、NF-κB 依存的な転写プログラムへ収束する経路も含まれます。文献では、FBXO3 活性の変化がサイトカイン応答の破綻やストレス関連の細胞状態と関連づけられており、免疫恒常性や炎症関連疾患の機序研究において重要な分子とされています。ユビキチン–プロテアソーム系の一部として、FBXO3 はプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークや、状況依存的なシグナル伝達中間体の制御を解析する上でも有用です。

FBXO3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXO3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXO3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXO3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXO3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXO3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXO3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXO3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXO3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXO3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。