FBXO10 Plasmide Double Nickase (h): sc-406159-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FBXO10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FBXO10 Double Nickase Plasmid (h) e il FBXO10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FBXO10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FBXO10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FBXO10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FBXO10 codifica un recettore di substrato di tipo F-box all’interno dei complessi E3 ubiquitina ligasi SKP1–CUL1–F-box (SCF), collegando proteine specifiche all’ubiquitinazione e alla successiva degradazione dipendente dal proteasoma. Attraverso la degradazione regolata di componenti della segnalazione e determinanti del destino cellulare, FBXO10 contribuisce al controllo dell’apoptosi, dell’omeostasi proteica e delle vie di risposta allo stress a valle. Alterazioni della funzione o dell’espressione di FBXO10 sono state associate a una deregolazione dei segnali di sopravvivenza e sono state studiate nel contesto della biologia delle neoplasie linfoidi, dove la proteostasi mediata dall’ubiquitina è spesso compromessa. Di conseguenza, FBXO10 rappresenta un bersaglio utile per interrogare l’architettura della via ubiquitina–proteasoma e il suo impatto sulla fitness cellulare e sui programmi di differenziamento.
FBXO10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBXO10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBXO10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBXO10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBXO10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.