Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FAT10 Plasmide Double Nickase (h): sc-402682-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAT10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAT10 Double Nickase Plasmid (h) e il FAT10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira UBD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAT10 Antibody (A-8): sc-393630
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAT10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402682-NIC | 20 µg | $410.00 |
UBD codifica FAT10 (noto anche come ubiquitina D), un modificatore ubiquitina-like che viene rapidamente indotto da citochine pro-infiammatorie e coniugato a proteine bersaglio per indirizzarne la degradazione da parte del proteasoma 26S. FAT10 partecipa alla regolazione dell’immunoproteasoma, al processamento dell’antigene e alla proteostasi responsiva allo stress, intersecando la segnalazione di NF-κB e altre vie associate all’infiammazione. Un’alterata espressione di UBD/FAT10 è stata riportata in contesti di infiammazione cronica e di turnover proteico disregolato, collegandola a fenotipi cellulari quali un controllo del ciclo cellulare alterato, una diversa sensibilità all’apoptosi e un rimodellamento metabolico. Queste caratteristiche rendono UBD un nodo utile per studiare i cambiamenti della stabilità del proteoma indotti dalle citochine e i programmi di segnalazione legati all’immunità.
FAT10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UBD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UBD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UBD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UBD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.