Fascin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-433603-ACT

Il gene murino **Fscn2** codifica **Fascin 2**, una proteina che fascicola l’actina e organizza array paralleli di **F-actina**, supportando protrusioni di membrana, forma cellulare e stabilità del citoscheletro. Le proteine della famiglia Fascin contribuiscono al rimodellamento dei filamenti di actina, interfacciandosi con la dinamica delle adesioni e con processi legati alla motilità, collegando l’architettura del citoscheletro alla meccanotrasduzione e all’organizzazione cellulare polarizzata. In contesti sensoriali ed epiteliali, Fascin 2 è associata a strutture specializzate ricche di actina, risultando quindi rilevante per lo studio del mantenimento del citoscheletro e dell’integrità tissutale. Un’alterata fascicolazione dell’actina e il rimodellamento mediato da fascin sono stati implicati in disfunzioni cellulari in modelli di malattie degenerative e proliferative, a supporto dell’indagine dei pathway dipendenti da **Fscn2** nei sistemi murini.

Fascin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fscn2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Fascin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fscn2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fscn2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Fascin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fscn2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Fascin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Fascin 2 nelle cellule tumorali con espressione di Fscn2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.