FAM20C Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-429814-LAC

Fam20c codifica FAM20C, una chinasi secreta localizzata principalmente nell’apparato di Golgi, che fosforila motivi Ser-x-Glu/pSer su un’ampia gamma di proteine extracellulari e secrete. Questa attività chinasica sostiene la maturazione e la funzione della via secretoria, includendo la fosforilazione di proteine della matrice extracellulare e di regolatori della biomineralizzazione, influenzando così osteogenesi, formazione della dentina e omeostasi tissutale. Nei modelli murini, un’alterata funzione di Fam20c è associata a fenotipi scheletrici e dentali ed è stata utilizzata per studiare reti di segnalazione che collegano la composizione della matrice alla differenziazione cellulare. Poiché FAM20C modifica molteplici substrati, perturbare la sua espressione offre un punto d’ingresso a livello di sistema nei programmi di fosforilazione extracellulare e nelle vie di sviluppo guidate dalla matrice.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM20C (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fam20c in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM20C (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fam20c, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAM20C. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fam20c e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.