FADS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404735-NIC

FADS1 codifica la desaturasi degli acidi grassi 1, una Δ5-desaturasi che catalizza un passaggio chiave e limitante la velocità nella biosintesi degli acidi grassi polinsaturi a lunga catena, convertendo l’acido dihomo-γ-linolenico in acido arachidonico e substrati correlati in precursori eicosanoidi a valle. Attraverso la regolazione della composizione lipidica di membrana e della disponibilità di mediatori lipidici, FADS1 influenza la segnalazione infiammatoria, l’omeostasi metabolica e processi di segnalazione cellulare legati al rimodellamento dei fosfolipidi e al metabolismo dell’acido arachidonico. Variazioni genetiche e alterazioni dell’espressione di FADS1 sono state associate a cambiamenti nei profili lipidici circolanti e alla suscettibilità a tratti complessi che coinvolgono fenotipi cardiometabolici e infiammatori, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sui programmi cellulari guidati dai lipidi. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di FADS1 consente di indagare il flusso metabolico, la dinamica delle membrane e le risposte trascrizionali dipendenti dai mediatori lipidici.

FADS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FADS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FADS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FADS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FADS1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.