Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Factor X Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404175-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Factor X Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Factor X CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Factor X CRISPR Activation Plasmid (h) e dal Factor X CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di F10. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Factor X Antibody (AHX-5050): sc-81739
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Factor X Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404175-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene umano **F10** codifica il **fattore X** della coagulazione, uno zimogeno di **serin-proteasi** dipendente dalla **vitamina K**, prodotto principalmente dagli epatociti e secreto nel plasma. Dopo l’attivazione a **fattore Xa** da parte dei complessi tenasici della via intrinseca ed estrinseca, il fattore Xa forma il complesso **protrombinasi** con il **fattore Va** su superfici fosfolipidiche, convertendo la protrombina in trombina e amplificando la formazione di fibrina e l’emostasi mediata dalle piastrine. Questo nodo centrale integra la segnalazione avviata dal fattore tissutale, l’assemblaggio dei complessi della coagulazione dipendente dal calcio e dalle membrane, e la regolazione da parte del sistema proteasi-inibitori all’interno della cascata coagulativa. Un’espressione o un’attività disregolata di F10 è associata a fenotipi emorragici e contribuisce alla biologia della trombosi, rendendolo rilevante per lo studio della dinamica delle vie della coagulazione, della regolazione genica epatica e del crosstalk tra reti di proteasi.
Factor X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di F10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Factor X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus F10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione F10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Factor X. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus F10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Factor X nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Factor X nelle cellule tumorali con espressione di F10 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.