EY-cadherin Plasmide Double Nickase (h): sc-401988-NIC

CDH18 codifica la EY-caderina umana, un recettore di adesione cellula–cellula calcio-dipendente della superfamiglia delle caderine, che contribuisce all’architettura dei tessuti e alla segnalazione mediata dal contatto. Attraverso l’adesione omofilica e il collegamento alle catenine e al citoscheletro di actina, la EY-caderina influenza l’organizzazione delle giunzioni aderenti, la polarità cellulare e il rimodellamento del citoscheletro. Alterazioni nei pattern di espressione delle caderine possono perturbare i programmi di adesione epiteliali e associati al sistema nervoso, influenzando la migrazione cellulare e gli stati di differenziamento. La disregolazione dell’adesione mediata da caderine è stata associata a fenotipi invasivi e a una segnalazione dello sviluppo aberrante in molteplici contesti patologici, rendendo CDH18 un bersaglio per studi meccanicistici sulla biologia delle giunzioni.

EY-cadherin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDH18 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDH18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDH18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDH18 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.