Exportin 4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404233-ACT

XPO4 codifica per l’esportina 4, un recettore di esportazione nucleare della famiglia delle carioferine-β che media il trasporto, dipendente da RanGTP, di specifici carichi proteici dal nucleo al citoplasma. Controllando la localizzazione subcellulare di proteine regolatorie, l’esportina 4 contribuisce al traffico nucleo–citoplasmatico, al controllo trascrizionale e a programmi più ampi di proteostasi. Un trasporto nucleo-citoplasmatico deregolato è una caratteristica ricorrente nella biologia del cancro e in altri stati proliferativi o associati a stress, rendendo XPO4 un nodo utile per studiare come le dinamiche di trasporto rimodellino gli output di segnalazione. L’analisi funzionale di XPO4 supporta studi meccanicistici del cross-talk tra il traffico intracellulare, la regolazione del ciclo cellulare e le risposte allo stress.

Exportin 4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di XPO4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Exportin 4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus XPO4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione XPO4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Exportin 4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus XPO4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Exportin 4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Exportin 4 nelle cellule tumorali con espressione di XPO4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.