Ets-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-416381-NIC

ETS2 codifica Ets-2, un membro della famiglia ETS di fattori di trascrizione specifici di sequenza che si lega ai motivi GGAA/T per regolare programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la sopravvivenza. L’attività di Ets-2 è modulata dalla fosforilazione dipendente da MAPK/ERK e integra segnali a valle delle vie dei fattori di crescita e delle citochine, plasmando le risposte trascrizionali in diversi tipi cellulari. Attraverso la regolazione di geni coinvolti nel rimodellamento della matrice extracellulare, nella segnalazione infiammatoria e nella proliferazione, ETS2 è stato implicato in reti oncogeniche e oncosoppressive dipendenti dal contesto, nonché in fenotipi immunitari e dello sviluppo. Alterazioni del dosaggio di ETS2 o dell’attivazione delle relative vie sono state associate a neoplasie e alla biologia legata al cromosoma 21, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione trascrizionale e sul crosstalk tra vie di segnalazione.

Ets-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ETS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ETS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ETS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ETS2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.