ETO Plasmide Double Nickase (h): sc-401755-NIC

RUNX1T1 (ETO) codifica un corepressore trascrizionale nucleare che si associa a fattori di trascrizione leganti il DNA per modulare programmi di espressione genica che controllano la differenziazione ematopoietica e l’impegno di linea. ETO contiene regioni di omologia Nervy che reclutano complessi NCoR/SMRT–HDAC e altri regolatori della cromatina, collegando RUNX1T1 al silenziamento epigenetico, alla repressione trascrizionale e al rimodellamento dell’attività degli enhancer. La deregolazione della funzione di RUNX1T1 è fortemente implicata nella leucemogenesi, soprattutto attraverso fusioni RUNX1–RUNX1T1 che perturbano le reti trascrizionali dipendenti da RUNX1 e bloccano la maturazione mieloide. Queste vie rendono RUNX1T1 un bersaglio utile per studiare i meccanismi di repressione trascrizionale, le dinamiche degli stati della cromatina e i programmi di differenziazione alterati in modelli cellulari rilevanti per il cancro.

ETO Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RUNX1T1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RUNX1T1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RUNX1T1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RUNX1T1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.