Estrogen Receptor beta Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400213-LAC

ESR2 umano codifica il recettore degli estrogeni beta (ERβ), un recettore nucleare attivato da ligando che funziona da fattore di trascrizione regolando reti geniche coinvolte nella differenziazione cellulare, proliferazione, apoptosi, infiammazione e omeostasi metabolica. In seguito al legame con estrogeni o ligandi selettivi, ERβ attiva la segnalazione canonica dei recettori nucleari tramite gli elementi di risposta agli estrogeni e l’interazione (crosstalk) con le vie MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB e TGF-β, plasmando programmi trascrizionali specifici del contesto. L’espressione di ESR2 e l’attività di ERβ sono state implicate nella biologia ormono-responsiva in tessuti dell’apparato riproduttivo, cardiovascolare, immunitario e del sistema nervoso centrale, e sono spesso studiate per il loro ruolo nella biologia tumorale, nella regolazione endocrina e nei meccanismi delle malattie infiammatorie. Una deregolazione della segnalazione di ESR2 può alterare la trascrizione dipendente dallo stato della cromatina, rendendolo un bersaglio rilevante per studiare isoforme recettoriali, utilizzo di co-regolatori e “rewiring” delle vie di segnalazione in modelli cellulari associati a patologia.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor beta (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ESR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor beta (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ESR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Estrogen Receptor beta. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ESR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.