ESD Plasmide Double Nickase (h): sc-404314-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ESD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ESD Double Nickase Plasmid (h) e il ESD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ESD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ESD Antibody (A-5): sc-514892
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ESD Plasmide Double Nickase (h) | sc-404314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ESD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ESD umano codifica l’idrolasi della S-formilglutatione, un’idrolasi serinica che svolge un ruolo nella detossificazione della formaldeide all’interno della via metabolica glutatione-dipendente di alcoli e aldeidi. Idrolizzando la S-formilglutatione in glutatione e formiato, ESD contribuisce al mantenimento dell’equilibrio redox cellulare e limita l’accumulo di specie carboniliche reattive in grado di danneggiare proteine e acidi nucleici. L’attività di ESD si intreccia con le risposte allo stress ossidativo e con una più ampia omeostasi metabolica, collegando alterazioni nella gestione delle aldeidi a stress genotossico e a modifiche della vitalità cellulare. Una capacità di detossificazione dei carbonili deregolata è stata studiata in contesti in cui stress ossidativo e da aldeidi contribuiscono a fenotipi associati a malattia, inclusi processi metabolici e neurodegenerativi.
ESD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ESD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ESD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ESD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ESD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.