ERp57 Plasmide Double Nickase (m): sc-420698-NIC

Il gene murino Pdia3 codifica ERp57 (PDIA3), un’isomerasi dei ponti disolfuro proteica del reticolo endoplasmatico che coopera con calnexina e calreticulina per catalizzare il ripiegamento ossidativo e il controllo qualità delle glicoproteine nascenti. L’attività di ERp57 sostiene la proteostasi del RE, la formazione di ponti disolfuro e la segnalazione legata allo stress del RE e alla risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response), influenzando la presentazione dell’antigene tramite il caricamento dei peptidi su MHC di classe I. Una disfunzione di PDIA3/ERp57 è stata associata ad alterazioni dell’equilibrio redox, a risposte allo stress proteotossico e a vie implicate nella neurodegenerazione, nella disfunzione metabolica e nella biologia tumorale. In quanto ossidoreduttasi multifunzionale, ERp57 è inoltre studiata per i suoi ruoli nell’omeostasi del calcio, nella segnalazione correlata all’adesione cellulare e in programmi trascrizionali di adattamento allo stress.

ERp57 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pdia3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pdia3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pdia3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pdia3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.