ERp57 Plasmide Double Nickase (h): sc-401497-NIC

PDIA3 codifica ERp57, un membro della famiglia delle isomerasi della proteina disolfuro che opera nel reticolo endoplasmatico catalizzando la formazione e l’isomerizzazione dei ponti disolfuro durante il ripiegamento delle glicoproteine. ERp57 coopera con calnexina e calreticolina nel controllo qualità del RE, sostenendo la maturazione delle proteine secretorie e di membrana e l’integrazione con la risposta alle proteine non correttamente ripiegate e con le vie di degradazione associate al RE. Oltre al ripiegamento proteico, ERp57 contribuisce alla presentazione dell’antigene tramite il caricamento dei peptidi su MHC di classe I e influenza processi di segnalazione regolati dal bilancio redox. La disregolazione della proteostasi e delle funzioni immuno-correlate dipendenti da PDIA3/ERp57 è stata associata a fenotipi di stress cellulare ed è studiata in contesti quali neurodegenerazione, stress metabolico e biologia delle cellule tumorali.

ERp57 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDIA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDIA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDIA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDIA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.