ERK 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400043-LAC

MAPK1 codifica la chinasi 2 regolata da segnali extracellulari (ERK2), una chinasi serina/treonina centrale all’interno della cascata MAPK RAS–RAF–MEK–ERK, che trasduce segnali di fattori di crescita e di stress dalla membrana plasmatica verso bersagli citoplasmatici e nucleari. ERK2 fosforila numerosi substrati, inclusi fattori di trascrizione e regolatori del ciclo cellulare, per controllare proliferazione, differenziamento, sopravvivenza e motilità. Attraverso il cross-talk di via con PI3K/AKT, JNK/p38 e con regolatori di feedback come le DUSP, MAPK1 contribuisce a modellare ampiezza e durata del segnale in molti tipi cellulari. Una segnalazione ERK deregolata è frequentemente associata a stati di segnalazione oncogenici e a processi infiammatori e neuro-sviluppativi aberranti, rendendo MAPK1 un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della trasduzione del segnale.

Le particelle di attivazione lentivirale ERK 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MAPK1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ERK 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ERK 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MAPK1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.