ERAB Plasmide Double Nickase (h): sc-405211-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ERAB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ERAB Double Nickase Plasmid (h) e il ERAB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSD17B10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ERAB Antibody (E-10): sc-393693
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ERAB Plasmide Double Nickase (h) | sc-405211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERAB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD17B10 codifica ERAB, un enzima mitocondriale multifunzionale noto anche come 17β-idrossisteroide deidrogenasi di tipo 10, che partecipa al catabolismo degli acidi grassi a catena corta e degli amminoacidi. ERAB è un componente del complesso mitocondriale RNasi P, supportando la maturazione dei tRNA e, più in generale, l’espressione genica mitocondriale e la fosforilazione ossidativa. Attraverso i suoi ruoli nel metabolismo mitocondriale e nella proteostasi, ERAB influenza l’equilibrio redox e l’omeostasi energetica cellulare nei tessuti metabolicamente attivi. Alterazioni della funzione di HSD17B10/ERAB sono state associate a disfunzione mitocondriale e a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo utile per studiare i meccanismi che collegano il metabolismo mitocondriale alle risposte cellulari allo stress.
ERAB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSD17B10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSD17B10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSD17B10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSD17B10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.