EPCR Plasmide Double Nickase (h): sc-402158-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EPCR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EPCR Double Nickase Plasmid (h) e il EPCR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PROCR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EPCR Antibody (RCR-49): sc-53982
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EPCR Plasmide Double Nickase (h) | sc-402158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EPCR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PROCR codifica il recettore endoteliale della proteina C (EPCR), una glicoproteina di membrana di tipo I espressa prevalentemente nell’endotelio vascolare, che lega la proteina C e la proteina C attivata per localizzare alla superficie cellulare segnali anticoagulanti e citoprotettivi. EPCR coopera con l’attivazione della proteina C mediata dal complesso trombomodulina–trombina e sostiene vie dipendenti dai recettori attivati da proteasi (PAR) che influenzano la funzione di barriera endoteliale, l’infiammazione e il traffico dei leucociti. Alterazioni dell’espressione di EPCR o del suo shedding possono perturbare l’equilibrio emostatico e l’omeostasi vascolare, collegando la biologia di PROCR a trombosi, vasculopatie infiammatorie e disfunzione endoteliale. In quanto recettore di superficie con interazioni ligando-recettore ben definite, EPCR è anche utilizzato come readout meccanicistico dell’interazione tra coagulazione e infiammazione in modelli cellulari e vascolari.
EPCR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PROCR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PROCR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PROCR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PROCR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.