ENX-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-417028-NIC

EZH2 codifica la metiltransferasi istonica ENX-1, la subunità catalitica del complesso repressivo Polycomb 2 (PRC2), che deposita H3K27me3 per imporre il silenziamento trascrizionale e la memoria epigenetica. Attraverso la compattazione della cromatina mediata da PRC2, ENX-1 regola la specificazione di linea, i programmi del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e il mantenimento di stati simil-staminali controllando l’accessibilità in corrispondenza di loci di geni dello sviluppo e della segnalazione. Un’attività deregolata di EZH2 è associata ad alterazioni degli stati della cromatina che sostengono programmi trascrizionali oncogenici e una differenziazione aberrante in molteplici contesti tumorali. In quanto regolatore epigenetico centrale, EZH2 è frequentemente studiato nelle vie che governano la proliferazione, la plasticità epitelio–mesenchimale e l’espressione di geni legati all’immunità.

ENX-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EZH2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EZH2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EZH2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EZH2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.