EID-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425516-ACT

Mouse EID-1 (Eid1) codifica un regolatore della differenziazione interagente con EP300/CBP che funge da modulatore trascrizionale all’interfaccia tra rimodellamento della cromatina e controllo del ciclo cellulare. EID-1 è stato collegato alla regolazione della trascrizione dipendente da RB/E2F e dei programmi di differenziazione, influenzando la capacità proliferativa e l’impegno di linea in tessuti in sviluppo e adulti. Attraverso interazioni con co-regolatori trascrizionali, può plasmare reti di espressione genica coinvolte nell’arresto della crescita, nelle risposte allo stress e nell’omeostasi tissutale. Un controllo trascrizionale associato a EID1 deregolato è rilevante per studi su stati anomali di proliferazione e differenziazione, inclusi contesti che modellano la segnalazione oncogenica e fenotipi dello sviluppo.

EID-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Eid1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EID-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Eid1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Eid1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EID-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Eid1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EID-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EID-1 nelle cellule tumorali con espressione di Eid1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.