Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EF-1 α2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401444-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EF-1 α2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EF-1 α2 Double-Nickase-Plasmid (h) und EF-1 α2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EEF1A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EF-1 α2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EF-1 α2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1A2 kodiert den eukaryotischen Translations-Elongationsfaktor 1 alpha 2 (EF-1α2), ein GTP-bindendes Protein, das während der Elongation der mRNA-Translation Aminoacyl-tRNAs an die A-Stelle des Ribosoms liefert. EF-1α2 trägt zur Kontrolle der Translation, zur Proteostase und zu zellulären Stressantworten bei; zudem bestehen Verbindungen zur Organisation des Zytoskeletts über aktinassoziierte Funktionen, wie sie für Mitglieder der EF1A-Familie beschrieben wurden. In menschlichen Geweben zeigt EEF1A2 eine angereicherte Expression in Neuronen und Muskelgewebe und ist wichtig, um in differenzierten Zellen eine hohe Proteinsynthesekapazität aufrechtzuerhalten. Eine Dysregulation oder genetische Veränderung von EEF1A2 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und krebsassoziierten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung translationsabhängiger Umbauprozesse von Zellzuständen macht.
EF-1 α2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EEF1A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EEF1A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EEF1A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EEF1A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.