Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401367-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EB1 Double Nickase Plasmid (h) e il EB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MAPRE1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EB1 Antibody (1A11/4): sc-47704
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401367-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401367-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAPRE1 codifica la proteina end-binding 1 (EB1), una proteina fondamentale che segue l’estremità “plus” dei microtubuli e riconosce il cappuccio di tubulina-GTP, coordinando la crescita e la stabilizzazione dei microtubuli. EB1 funge da impalcatura per le reti di +TIP, collegando i microtubuli dinamici ai cinetocori e alla corteccia cellulare per sostenere l’assemblaggio del fuso, la segregazione dei cromosomi e la migrazione cellulare direzionale. Attraverso interazioni con APC, le proteine CLIP e i regolatori di dineina/dinactina, EB1 integra la dinamica dei microtubuli con la progressione mitotica e le vie della polarità cellulare. Una funzione e/o un’espressione deregolata di MAPRE1/EB1 è stata associata ad alterazioni della stabilità cromosomica e al rimodellamento del citoscheletro osservati in studi di biologia cellulare correlati al cancro.
EB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAPRE1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAPRE1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAPRE1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAPRE1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.