dystrophin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420021-ACT

Dmd はジストロフィンをコードしており、ジストロフィンは筋鞘（サルコレマ）に存在するジストロフィン‐糖タンパク質複合体にアクチン骨格ネットワークを連結する大型の細胞骨格タンパク質で、筋収縮時の膜安定性を支えます。マウスの骨格筋および心筋では、ジストロフィンはメカノトランスダクション、コスタメアの構築、カルシウム恒常性の維持に寄与し、発現が低下すると炎症や線維化リモデリング経路にも下流で影響が及びます。ジストロフィンの機能破綻または機能低下は、筋線維の進行性損傷と筋組織の完全性低下に関連しており、Dmd は筋変性表現型を研究するうえで中核となる遺伝子です。Dmd 依存的なプロセスは、神経筋疾患の文脈で、細胞外マトリックスシグナルの変化、ストレス応答、筋核の転写プログラムの変容をモデル化する際にも重要です。

dystrophin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Dmdの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

dystrophin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Dmd 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDmd転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性dystrophinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDmd遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるdystrophin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDmd発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるdystrophin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。